试剂配置
A:0.5~1%的伊红酒精溶液:
称取伊红Y 0.5~1 g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精(即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可)100毫升溶解。
B:苏木素染液配方:(配制3000 ml,可按比列减少)
苏木精6 g
无水乙醇100 ml
硫酸铝钾150 g
蒸馏水2000 ml
碘酸钠1.2 g
冰醋酸120 ml
甘油900 ml
配制方法:将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,最后加入冰醋酸和碘酸钠。
C:1%盐酸酒精分化液:将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。
染色流程
(1)二甲苯(Ⅰ)15min
(2)二甲苯(Ⅱ)15 min
(3)100%乙醇(Ⅰ)5min
(4)100%乙醇(Ⅱ)5 min
(5)80%乙醇5min
(6)蒸馏水5 min
(7)苏木精液染色5 min
(8 )流水稍洗去苏木精液1-3 s
(9) 1%盐酸乙醇1-3 s
(10)稍水洗10-30 s
(13)蒸馏水过洗1-2 s
(14) 0.5%伊红液染色1-3 min
(15)蒸馏水稍洗1-2 s
(16) 80%乙醇稍洗1-2 s
(17) 95%乙醇(Ⅰ)2-3 s
(18) 95%乙醇(Ⅱ)3-5 s
(19)无水乙醇5-10 min
(20)石炭酸二甲苯5-10 min
(21)二甲苯(Ⅰ)2 min
(22)二甲苯(Ⅱ)2 min
(23)二甲苯(Ⅲ)2 min
(24)中性树胶封固
注:①第(10)、(11)步可省去,(12)步冲水时间需延长至20-30min。
②第(20)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。
*冷冻切片HE染色步骤:
(1)冰冻切片固定10~30 s
(2)稍水洗1~2 s
(3)苏木精液染色(60℃)30~60 s
(4)流水洗去苏木精液5~10 s
(5)1%盐酸乙醇1~3 s
(6)稍水洗1~2 s
(7)促蓝液返蓝5~10 s
(8)流水冲洗15~30 s
(9)0.5%曙红液染色30~60 s
(10)蒸馏水稍洗1~2 s
(11)80%乙醇1~2 s
(12)95%乙醇1~2 s
(13)无水乙醇1~2 s
(14)石炭酸二甲苯2~3 s
(15)二甲苯(Ⅰ)2~3 s
(16)二甲苯(Ⅱ)2~3 s
(17)中性树胶封固。
注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。
染色结果 :细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。
4.12切片脱水透明 切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。